盡管沒有“路線圖"詳細(xì)說明獲得監(jiān)管部門批準(zhǔn)進(jìn)入臨床所需的研究，但??FDA、EMA 和 PMDA 最近發(fā)布的文件強(qiáng)調(diào)了 候選藥物的代謝和藥物相互作用 (DDI)的潛力。

FDA 2020 年最終確定的行業(yè)指南強(qiáng)調(diào)了臨床前開發(fā)中 DDI 成分的重要性和標(biāo)準(zhǔn)化，指出“對(duì) DDI 的研究不充分可能會(huì)阻礙 FDA 確定研究藥物的益處和風(fēng)險(xiǎn)的能力，并可能導(dǎo)致限制性標(biāo)簽、上市后要求或承諾"和/或推遲批準(zhǔn)，直到獲得有關(guān) DDI 的足夠信息。"? 

臨床前數(shù)據(jù)包中藥物相互作用研究的目的是通過基于風(fēng)險(xiǎn)的方法預(yù)測(cè)與伴隨藥物發(fā)生有害相互作用的可能性，從而防止患者不必要地被排除在臨床試驗(yàn)之外。 

監(jiān)管機(jī)構(gòu)已發(fā)布了關(guān)鍵指導(dǎo)文件，供藥物開發(fā)商用于規(guī)劃這些關(guān)鍵的臨床前檢測(cè)。例如，2020 年 1 月，F(xiàn)DA 發(fā)布了行業(yè)最終指南“體外代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的藥物相互作用研究"，其重點(diǎn)是?體外實(shí)驗(yàn)，以評(píng)估涉及藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的 DDI 潛力。體外結(jié)果如何以基于風(fēng)險(xiǎn)的方法為臨床 DDI 研究計(jì)劃提供信息。最終指南是 2017 年指南草案的更新。全球三大主要機(jī)構(gòu)（FDA、EMA、PMDA）之間的期望差異以及 2017 年至 2020 年 FDA 指南的具體更新可以從Brian Ogilvie 博士和 XenoTech 創(chuàng)始人 Andrew Parkinson 博士 ?制作的?2020 年海報(bào)中看出?。

基本體外 DDI 研究： 

• 血漿蛋白結(jié)合

• 滲透性

• 代謝穩(wěn)定性

• 代謝物鑒定（Met ID）

• 反應(yīng)表型分析

• CYP酶抑制

• CYP酶誘導(dǎo)

• 藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制

• 藥物轉(zhuǎn)運(yùn)底物

初步測(cè)定： 

研究：?血漿蛋白結(jié)合

目的：?確定血漿中可用于人類和臨床前物種的靶標(biāo)和脫靶相互作用的結(jié)合藥物和游離藥物的百分比 

體外研究期望： ?“在開始人體臨床試驗(yàn)之前，通常應(yīng)評(píng)估動(dòng)物和人類的體外代謝和血漿蛋白結(jié)合數(shù)據(jù)以及用于重復(fù)劑量毒性研究的物種的全身暴露數(shù)據(jù)。" ¹

研究： 滲透性

目的：?測(cè)量滲透性以預(yù)測(cè)腸道吸收和組織分布 

體外研究預(yù)期：?研究人員測(cè)量測(cè)試物品跨細(xì)胞系（例如 Caco-2 或 MDCKII 細(xì)胞）或人工膜（例如 PAMPA）的滲透性，并與高滲透性和低滲透性對(duì)照進(jìn)行比較。 

研究： 代謝穩(wěn)定性

目的：?測(cè)量人類和臨床前物種的體外內(nèi)在清除率 

體外研究預(yù)期：?將測(cè)試品與混合的微粒體、S9、血漿或肝細(xì)胞一起孵育，以確定清除率。經(jīng)過處理的測(cè)試系統(tǒng)用于比較母體化合物與藥物代謝酶相互作用之前和之后的濃度，以確定細(xì)胞/細(xì)胞器內(nèi)是否存在顯著的代謝。 

研究：?代謝物表征/鑒定 (Met ID)

目的： ?“確定藥物產(chǎn)生的代謝物的數(shù)量和結(jié)構(gòu)，以及代謝途徑是平行的還是順序的" 

體外研究期望： ?FDA 建議盡早進(jìn)行代謝物表征和鑒定（“我們鼓勵(lì)在藥物開發(fā)過程中盡早鑒定用于非臨床安全評(píng)估的動(dòng)物與人類之間藥物代謝的任何差異。" ²）建議的測(cè)試系統(tǒng)包括人肝細(xì)胞、人肝微粒體或重組酶系統(tǒng)。 

代謝介導(dǎo)的藥物相互作用： 

研究：?反應(yīng)表型

目的： ?“確定研究藥物是否是代謝酶的底物" 

體外研究期望：?在兩個(gè)都認(rèn)可的測(cè)試系統(tǒng)中監(jiān)測(cè)底物損失或代謝物形成的有效方法。申辦者“應(yīng)該同時(shí)使用"經(jīng)過驗(yàn)證的、可重復(fù)的分析方法：人肝微粒體（+10 名供體）、人重組 CYP 酶。如果某種酶對(duì)藥物消除的貢獻(xiàn)率>25%，則需要進(jìn)行臨床 DDI 研究。 

標(biāo)準(zhǔn)：主要細(xì)胞色素 P450 酶（CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4/5） 

如果合適的話，還可以添加：其他 CYP（CYP2A6、CYP2J2、CYP4F2、CYP2E1）、I 期酶（MAO、FMO、XO、AO）、II 期酶（UGT） 

研究：? CYP 酶抑制

目的： ?“確定研究藥物是否是代謝酶的抑制劑" 

體外研究預(yù)期：?對(duì) 7 個(gè)主要 CYP（CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4/5）具有可逆（直接）和 TDI（時(shí)間依賴性抑制）。測(cè)試系統(tǒng)包括人肝微粒體、重組CYP表達(dá)系統(tǒng)的微粒體、肝細(xì)胞。 

研究： CYP?酶誘導(dǎo)

目的： ?“確定研究藥物是否是代謝酶的誘導(dǎo)劑" 

體外研究預(yù)期：  標(biāo)準(zhǔn)：主要 CYP（CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4/5）的誘導(dǎo)潛力 

如果合適的話，還可以補(bǔ)充：如果 CYP3A4/5 產(chǎn)生陽性誘導(dǎo)結(jié)果，則跟進(jìn) CYP2C 家族（CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19） 

測(cè)試系統(tǒng)包括來自至少三個(gè)供體的可平板冷凍保存或新鮮分離的人肝細(xì)胞或永生化肝細(xì)胞。 

轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的藥物相互作用： 

研究： 藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制

目的：? “確定研究藥物是否是轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的抑制劑" 

體外研究預(yù)期：?轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白研究的時(shí)間建議可能會(huì)根據(jù)化合物的分子特性而有所不同（“每種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的體外評(píng)估時(shí)間可能會(huì)根據(jù)研究藥物的治療適應(yīng)癥而有所不同"）以及當(dāng)前的指導(dǎo)建議針對(duì)每種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白類型使用不同的測(cè)試系統(tǒng)。 

標(biāo)準(zhǔn)：P-gp、BCRP、OATP1B1、OATP1B3、OCT2、MATE1、MATE2-K、OAT1、OAT3 

附加（如果適用）：BSEP、OCT1 ³

研究：?藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白底物

目的： ?“確定研究藥物是否是轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的底物" 

體外研究預(yù)期：   ABC/外排：P-gp和BCRP（但不推薦用于高溶解性、高滲透性藥物） 

SLC/攝?。喝绻闻K（OATP1B1、OATP1B3）和腎臟（OAT1、OAT3、OCT2、MATE1、MATE2-K）底物電位表明肝臟攝取/消除，則應(yīng)根據(jù) ADME（吸收、分布、代謝、排泄）數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估或腎分泌顯著。